MELANOMA
El gen NRAS, situado en el cromosoma 1p13.2, pertenece a la familia RAS formada por los genes NRAS, KRAS y HRAS que codifican unas GTPasas involucradas en la vía de proliferación celular MAPK. Un 15-25% de los melanomas presentan mutaciones puntuales en NRAS, principalmente Q61R y Q61K, lo que resulta en la activación constitutiva de la vía. Los melanomas con mutaciones de NRAS suelen encontrarse en pacientes de edad avanzada con historial de exposición crónica a UV y confieren mal pronóstico. Estas mutaciones también se han identificado como mecanismos de resistencia adquirida al tratamiento con inhibidores de BRAF. Aunque las mutaciones de NRAS son mayoritariamente excluyentes con las mutaciones de BRAF (presentes en un 50% de los melanomas) se han descrito casos en los que ambas mutaciones coexisten. Ensayos clínicos recientes indican que los pacientes con melanomas con mutaciones de NRAS son candidatos a tratamiento con inhibidores de MEK tales como MEK162 o trametinib.
Descripción de la técnica:
Detección de deleciones, inserciones, inversiones y sustituciones en targeted-regions y hotspot en 22 genes (EGFR, ALK, ERBB2, ERBB4, FGFR1, FGFR2, FGFR3, MET, DDR2, KRAS, PIK3CA, BRAF, AKT1, PTEN, NRAS, MAP2K1, STK11, NOTCH1, CTNNB1, SMAD4, FBXW7 y TP53) mediante secuenciación masiva.
Amplificación de librerías de DNA mediante PCR con el kit Oncomine Solid Tumour DNA. Cuantificación de las librerías con Ion Library TaqMan Quantitation Kit. PCR en emulsión, enriquecimiento de ISPs y carga del chip en Ion Chef System. Secuenciación masiva en Ion Personal Genome Machine (PGM) System. Análisis con IonReporter 5.2. ThermoFisher Scientific software.
Tipo de muestra: Tejido tumoral en parafina.
Bibliografía:
- Fedorenko IV et al. B J Cancer 2015; 112:217-226.
- Muñoz-Couselo E et al. Ann Transl Med 2015; 3(15):207-222.