Ruth Román1*, Natalia Rodón1*, Montse Verdú1,2, Beatriz García-Peláez1 , Mercè Pujol1 y Xavier Puig1,2,3
1BIOPAT. Biopatologia Molecular, SL, Grup Assistència, Barcelona; 2Histopat Laboratoris, Barcelona; 3Hospital de Barcelona, SCIAS, Grup Assistència, Barcelona.
Introducción:
Las mutaciones en el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) se correlacionan con respuesta a inhibidores del dominio tirosina cinasa (TKIs) y aumento de la supervivencia. La necesidad de establecer con exactitud el estado mutacional de EGFR y el hecho de que en la gran mayoría de casos de cáncer de pulmón el material tisular disponible es muy limitado, ha potenciado la aparición de técnicas de alta sensibilidad, como la basada en la amplificación por PCR a tiempo real, que permite alcanzar una sensibilidad del 1-5% de copias de DNA mutadas. El objetivo de este estudio fue determinar la capacidad de la PCR a tiempo real de detectar mutaciones en una serie de adenocarcinomas previamente considerados no mutados mediante secuenciación.
Material y Métodos:
La presencia de mutaciones de EGFR se evaluó en una serie de 64 adenocarcinomas primarios de pulmón, mediante secuenciación por Sanger de los exones 19, 20 i 21. Aquellos casos no mutados se estudiaron adicionalmente por PCR a tiempo real con el kit comercial Therascreen EGFR PCR (Qiagen). La sensibilidad real de ambas técnicas se comprobó con diluciones al 20%, 10%, 5% y 1% de las líneas celulares EGFR (ΔE746-A750/+) y EGFR (+/+) (Horizon Diagnostics). El tipo histológico fue establecido por dos patólogos y confirmado mediante inmunohistoquímica (CK7, CK20, TTF1, p63, CK5/6 y 34βE12).
Resultados:
La secuenciación por Sanger permitió detectar mutaciones en 8 casos (12.3%). El uso de la PCR a tiempo real incrementó el número de casos mutados a 12 casos (18.8%). Ocho de éstos 12 casos (66,7%) eran adenocarcinomas infiltrantes de tipo lepídico no mucinoso.
Conclusiones:
La incorporación de la técnica de PCR a tiempo real incrementa notablemente la detección de mutaciones del gen EGFR en adenocarcinoma de pulmón y es especialmente recomendable su empleo en casos con patrón lepídico o con poca representación tumoral.